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超敏ECL化学发光即用型底物1.0图片
产品货号:
ZN1943
中文名称:
超敏ECL化学发光即用型底物1.0
英文名称:
产品规格:
25ml×2/50ml×2/100ml×2/200ml×2/500ml×2
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
产品保存:4℃避光保存,一年有效。
产品规格:
100ml 工作液(可用于 10000cm2的膜)
溶液 A 500ml
溶液 B 500ml
产品说明:超敏 ECL 化学发光试剂盒,是一款具有超高灵敏度的化学发光(ECL)底物,可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应,发出荧光,从而可以通过用×光片压片或CCD 成像仪检测样品,当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时,可检测到常规 ECL 底物无法检测的低丰度靶蛋白。
产品特点:
1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物
2.使用适当的一抗和二抗时,可在 NC 膜或PVDF 膜上检测丰度为低皮克级的蛋白条带
3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
4.通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像
5.试剂盒组分能够在 4℃条件下稳定放置一年
7.配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测重要产品信息:好的免疫印迹结果需要优化实验条件,包括样品量,凝胶类型,转移方法,膜类型,封闭剂,洗涤缓冲液,一抗浓度,二抗浓度和孵育时间等。
1.为获得最佳效果,在孵育步骤中使用摇床。
2.不要使用叠氮化钠作为缓冲液的防腐剂,因为它会抑制 HRP。
3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子。金属装置必须没有可见的生锈痕迹,这可能导致斑点和/或高背景。
4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。
5.由于阻断剂与抗体的交叉反应性引起非特异性信号,所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。阻止缓冲区也会影响系统的灵敏度。
6.当使用抗生物素蛋白/生物素系统时,避免使用牛奶作为阻断剂,因为牛奶含有不同量的内源性生物素,导致高背景信号。
7.使用足够量的洗涤缓冲液,封闭缓冲液,抗体溶液和底物工作溶液来覆盖印迹并确保其永不变干。使用大的封闭和洗涤缓冲液体积可以使非特异性信号最小化。
8.将 Tween-20洗涤剂(终浓度为0.05-0.1%)加入到封闭缓冲液和所有稀释的抗体溶液中,以减少非特异性信号。
注意事项:
1.A 液和 B 液吸取过程中必须更换移液器枪头,避免相互污染失效。
2.A 液和 B 液混合为工作液后,需避免强氧化剂如次氯酸钠等对工作液的影响。
3.须确保试剂瓶干净,无微生物或其它试剂污染。
4.为了您的安全,请穿实验服并佩戴一次性手套。
需要材料:
NC 膜或PVDF 膜
X 射线胶片或成像系统
摇床
洗涤缓冲液:含有 0.05-0.1%吐温 20的洗涤液,PBS:10mM 磷酸钠,150mM NaCl,pH7.2 TBS:10mM Tris,150mM NaCl,pH7.4
特异性的一抗,用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释
HRP 标记的二抗,特异性针对一抗,用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释
封闭液:洗涤缓冲液中 1-5%(w/ v)封闭剂(例如酪蛋白,BSA或脱脂奶粉)
注意:我们的ECL底物与所有封闭缓冲液兼容
使用说明:
1.室温封闭膜 60分钟,同时摇动。
2.去除封闭液并添加一抗。在室温振荡培养 1 小时或在 2-8℃过夜振荡。
3.将膜悬浮于清洗缓冲液中摇动 5分钟以上。更换清洗缓冲液至少 4-6次。增加洗涤缓冲液体积,洗涤次数和洗涤持续时间可能有助于使背景信号最小化。
4.在室温下孵育二抗 1 小时,同时摇动。
5.重复步骤 3,去除未结合的HRP 结合物。
注意:与 HRP 结合物孵育后,膜必须彻底清洗。
6.通过混合等量的检测试剂 A和 B 来制备底物工作溶液。每平方厘米膜使用 0.1mL 工作溶液。
7.在室温下用工作液孵育印迹膜 1-2分钟。
8.将印迹膜放在透明的保鲜膜或保护膜中。使用吸收性的纸巾去除多余的液体,小心地将气泡压出。
9.将印迹膜放在×光胶片或成像系统上显色。底物孵育后的30分钟内,发光最强烈。
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